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Coltivazione e conservazione di funghi e tartufi
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Terenzio_Terenzio
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Messaggio da Terenzio_Terenzio » lun lug 20, 2020 1:50 pm

Eccomi qui, lunedì scorso ho inoculato 5 piastre di agar.

Come detto su discord da @Aryaman, la piastra più scura aveva una bella contaminazione, quindi l'ho buttata.

Qui di seguito linko le foto delle 4 petri ancora "sane", per quanto posso saperne. Non capisco se il micelio è buono o in realtà sono contaminazioni, in quanto sembra più "fluffy" del solito micelio che sono abituato a vedere nelle PF o nei grains.

E' anche vero che, leggendo in giro, se fossero contaminazioni avrebbero colonizzato tutta la piastra nel giro di pochissimo tempo (tipo 1 giorno, mi confermate?).

ecco a voi:
https://ibb.co/NtKGvNw
https://ibb.co/Pg4K8r7
https://ibb.co/2srNLHN
https://ibb.co/R2R5sb2
https://ibb.co/D5XJpWb


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Re: update agar agar

Messaggio da asklepios » lun lug 20, 2020 5:05 pm

È proprio lui, complimenti. Nella quarta foto al centro della piastra c'è una macchia un po' più chiara che potrebbe essere una muffa, ma senza vedere i filamenti da vicino è difficile dire. Comunque hai tante piastre da cui fare trasferimenti. Un modo per accertarsi di avere a che fare con micelio fungino è annusare le piastre prima di buttarle (dopo che hai fatti i trasferimenti). L'odore dovrebbe essere tipico di funghi, non molto forte ma comunque distinguibile. Tieni però presente che nelle prime piastre potrebbe esserci anche altro, che potrebbe confondere l'odore

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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » lun lug 20, 2020 5:42 pm

oh bene!
Anche io avevo dubbi su quello segnato da te, in quanto a vedere da foto comparative su shroomery e ha l'aria di essere contam... vedremo come và!

Secondo te ha senso aspettare che siano colonizzati al 100% o posso già fare transfer ?

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Re: update agar agar

Messaggio da asklepios » lun lug 20, 2020 6:12 pm

Volendo puoi fare già transfer ma aspettare qualche giorno non fa male, così puoi isolare un po' più facilmente la crescita che ti sembra più veloce e in salute. Fino al 100% comunque no. Vedi tu, in base anche al tempo che hai

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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » mar lug 21, 2020 9:22 am

QUesta mattina risultano così:
https://ibb.co/QMLf24Q
https://ibb.co/QX2prf4
https://ibb.co/Q8JyRTC
https://ibb.co/10qv5kP
https://ibb.co/10qv5kP

Sono abbastanza sicuro che almeno 1 piastra ha contaminazioni.
@asklepios cosa ne pensi? Non ho nemmeno idea di quali parti posso selezionare per un transfer, perchè non riconosco il micelio classico tutto ramificato.

Ho inoltre una domanda differente: ho l'ultimo flush di PF e mi sta facendo un gigante, solo soletto, ma gigante. Voglio clonarlo, ma mi chiedevo se una volta clonato lo posso essiccare e tenere o avendolo aperto come un branzino mi conviene buttarlo.

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Re: update agar agar

Messaggio da asklepios » mar lug 21, 2020 2:11 pm

Ciao,
La crescita rizomorfica del micelio è sicuramente distintiva e può aiutare nel distinguere il micelio da altre muffe. Ciò detto, nella mia (per quanto limitata) esperienza, l'ho osservato raramente su agar, solo da una clonazione che ho fatto. Alcuni dicono che sia dovuto alla quantità di nutrienti nell'agar, ho provato a diminuire i nutrienti sia a fare un trasferimento su un pezzo di cartone (che di nutrienti dovrebbe averne ben pochi), di crescita rizomorfica neanche l'ombra. Nonostante questo, i funghi sono cresciuti e hanno esibito le classiche ramificazioni sui cereali. In ogni caso, pare non essere un tratto che riveste risvolti pratici (tipo maggiore potenza o aggressività del genotipo in questione), ma è più per una facilità di identificazione.

Tornando alle tue piastre comunque, mi sembra di vedere due fenotipi, uno più bianco latte e più denso, uno di un bianco meno intenso e con crescita più espansa e meno densa. Io fossi in te farei un trasferimento di entrambi, poi al secondo trasferimento annusi e ti rendi subito conto di quale profuma di funghi e quale no. Il fenotipo bianco molto denso potrebbe essere muffa, l'ho già visto in passato, ma non necessariamente. Purtroppo quando è così può diventare davvero difficile distinguere prima che avvenga la sporulazione. Vedere una piastra completamente colonizzata può comunque aiutare, in quanto il micelio, anche se non necessariamente rizomorfico, cresce in maniera piuttosto uniforme e regolare, mentre la muffa (per esempio il trichoderma), pur essendo bianca prima della sporulazione, cresce molto in fretta e ha un aspetto irregolare, quasi globoso. Io farei un paio di trasferimenti per entrambi e lascerei colonizzare la piastra per vedere come cresce e poterlo poi annusare.

Tutto quello che ho scritto sopra può ovviamente essere evitato se hai un fungo da clonare. Clonando elimini ogni dubbio. Poi è ovvio, se stai lavorando con una nuova varietà che ancora non hai cresciuto non c'è scampo, ma se già hai un fungo da clonare ti risparmi un bel po' di lavoro. Comunque sì, una volta che hai clonato il fungo puoi tranquillamente essiccarlo e consumarlo, alla fine lo stai solo tagliando, niente di dannoso, si seccherà anche più in fretta. C'è chi clona immergendo prima il fungo in candeggina, anche se personalmente non ho avuto successo con questo metodo, e lì è ovvio che poi lo devi buttare.

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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » mar lug 21, 2020 2:16 pm

asklepios ha scritto:
mar lug 21, 2020 2:11 pm
Ciao,
La crescita rizomorfica del micelio è sicuramente distintiva e può aiutare nel distinguere il micelio da altre muffe. Ciò detto, nella mia (per quanto limitata) esperienza, l'ho osservato raramente su agar, solo da una clonazione che ho fatto. Alcuni dicono che sia dovuto alla quantità di nutrienti nell'agar, ho provato a diminuire i nutrienti sia a fare un trasferimento su un pezzo di cartone (che di nutrienti dovrebbe averne ben pochi), di crescita rizomorfica neanche l'ombra. Nonostante questo, i funghi sono cresciuti e hanno esibito le classiche ramificazioni sui cereali. In ogni caso, pare non essere un tratto che riveste risvolti pratici (tipo maggiore potenza o aggressività del genotipo in questione), ma è più per una facilità di identificazione.

Tornando alle tue piastre comunque, mi sembra di vedere due fenotipi, uno più bianco latte e più denso, uno di un bianco meno intenso e con crescita più espansa e meno densa. Io fossi in te farei un trasferimento di entrambi, poi al secondo trasferimento annusi e ti rendi subito conto di quale profuma di funghi e quale no. Il fenotipo bianco molto denso potrebbe essere muffa, l'ho già visto in passato, ma non necessariamente. Purtroppo quando è così può diventare davvero difficile distinguere prima che avvenga la sporulazione. Vedere una piastra completamente colonizzata può comunque aiutare, in quanto il micelio, anche se non necessariamente rizomorfico, cresce in maniera piuttosto uniforme e regolare, mentre la muffa (per esempio il trichoderma), pur essendo bianca prima della sporulazione, cresce molto in fretta e ha un aspetto irregolare, quasi globoso. Io farei un paio di trasferimenti per entrambi e lascerei colonizzare la piastra per vedere come cresce e poterlo poi annusare.

Tutto quello che ho scritto sopra può ovviamente essere evitato se hai un fungo da clonare. Clonando elimini ogni dubbio. Poi è ovvio, se stai lavorando con una nuova varietà che ancora non hai cresciuto non c'è scampo, ma se già hai un fungo da clonare ti risparmi un bel po' di lavoro. Comunque sì, una volta che hai clonato il fungo puoi tranquillamente essiccarlo e consumarlo, alla fine lo stai solo tagliando, niente di dannoso, si seccherà anche più in fretta. C'è chi clona immergendo prima il fungo in candeggina, anche se personalmente non ho avuto successo con questo metodo, e lì è ovvio che poi lo devi buttare.
A questo punto mi viene da dire: stasera si fanno dei transfer!

Grazie mille per la conoscenza condivisa! Vi tengo aggiornati ;)


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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » mer lug 22, 2020 9:45 am

Eccoci al consueto update.

Ho fatto i transfer ieri sera, compresa una clonazione dall'ultimo big boi (lui: https://ibb.co/tHCWxnp) che ho raccolto.

Di per sè non credo di aver fatto un bruttissimo lavoro, anche se ho dei dubbi: quando asporto un pezzetto di agar con micelio, lo posiziono a faccia in giù(col micelio verso il nuovo agar)?

Inoltre credo di aver trovato un errore nella mia procedura: le piastre vergini le ho messe in frigo a testa in giù quando le preparai, e quando le ho tirate fuori ieri, dopo un momento a temperatura ambiente, hanno iniziato a creare acqua sull'agar (come piccole gocce). Ho la terribile paura che questo mandi il lavoro a farsi friggere. Non ho avuto modo di evitare l'acqua in quanto almeno per il momento del transfer ho dovuto tenere le piastre a testa in su.

Inoltre, nell'usare il bisturi disinfettato e poi messo a sterilizzare su fiamma, ho lasciato della "cenere" sul primo transfer fatto, aka c'è del nero che si è staccato dalla lama.
Dal secondo transfer in poi ho fatto fiamma->disinfettante->pulizia su scottex impregnato d'alcol (sò che non ha molto senso la doppia sterilizzazione, è piu per evitare di portarmi dietro lo "sporco" nero).

Allego una foto: https://ibb.co/RNYY9fd

In basso a sx c'è il clone, mentre gli altri sono i transfer. Se non si vede bene, è colpa di alcune piastre che esternamente erano sporche di acqua e sapone evaporata.

@asklepios che ne pensi?

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Re: update agar agar

Messaggio da asklepios » mer lug 22, 2020 12:11 pm

Bello grande il fungo! Valeva la pena di clonarlo.
quando asporto un pezzetto di agar con micelio, lo posiziono a faccia in giù(col micelio verso il nuovo agar)
È uguale, come riesci

In quanto alla condensa che si è formata tirando le piastre fuori dal frigo, non ti so dire come puoi evitarla in quanto non ho personalmente l'abitudine di versare più piastre di quelle che uso. La condensa che incontro io è eventualmente quando le verso troppo calde, ma comunque non è un problema se non è troppa. Diventa un problema quando comincia a raccogliersi in una pozzanghera sulla superficie dell'agar, in quanto lava in giro eventuali contaminanti, rendendo inutile l'utilizzo dell'agar. Se la condensa che hai tu non è eccessiva non dovrebbe crearti problemi.
"cenere" sul primo transfer fatto, aka c'è del nero che si è staccato dalla lama
La cenere non è un problema, eventualmente puoi pulire la lama tra un trasferimento e l'altro, ma l'ultimo passaggio prima che tocchi l'agar deve comunque essere sempre la fiamma.

Purtroppo le tue piastre mi sembrano contaminate. La superficie dell'agar dovrebbe essere uniforme, in colore e consistenza, se non per dove hai fatto il trasferimento. Mi sembra di vedere delle macchie bianche e alcune anche gialle, soprattutto nella piastra in alto a destra e in basso a destra. Poi magari è solo un alone esterno, ma se è anche all'interno allora sono batteri. Non scoraggiarti comunque, per le prime volte è normale, è solo questione di fare un po' più di pratica e attenzione nel maneggiarle. Quella in alto a sinistra ha un po' di condensa e non si riesce a vedere niente, ma se sotto è pulita senza macchie e aloni potrebbe essere buona. Hai seguito alla lettera i passaggi che ho scritto nella guida? Magari ti è sfuggito qualcosa

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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » mer lug 22, 2020 12:37 pm

asklepios ha scritto:
mer lug 22, 2020 12:11 pm
Bello grande il fungo! Valeva la pena di clonarlo.
quando asporto un pezzetto di agar con micelio, lo posiziono a faccia in giù(col micelio verso il nuovo agar)
È uguale, come riesci

In quanto alla condensa che si è formata tirando le piastre fuori dal frigo, non ti so dire come puoi evitarla in quanto non ho personalmente l'abitudine di versare più piastre di quelle che uso. La condensa che incontro io è eventualmente quando le verso troppo calde, ma comunque non è un problema se non è troppa. Diventa un problema quando comincia a raccogliersi in una pozzanghera sulla superficie dell'agar, in quanto lava in giro eventuali contaminanti, rendendo inutile l'utilizzo dell'agar. Se la condensa che hai tu non è eccessiva non dovrebbe crearti problemi.
"cenere" sul primo transfer fatto, aka c'è del nero che si è staccato dalla lama
La cenere non è un problema, eventualmente puoi pulire la lama tra un trasferimento e l'altro, ma l'ultimo passaggio prima che tocchi l'agar deve comunque essere sempre la fiamma.

Purtroppo le tue piastre mi sembrano contaminate. La superficie dell'agar dovrebbe essere uniforme, in colore e consistenza, se non per dove hai fatto il trasferimento. Mi sembra di vedere delle macchie bianche e alcune anche gialle, soprattutto nella piastra in alto a destra e in basso a destra. Poi magari è solo un alone esterno, ma se è anche all'interno allora sono batteri. Non scoraggiarti comunque, per le prime volte è normale, è solo questione di fare un po' più di pratica e attenzione nel maneggiarle. Quella in alto a sinistra ha un po' di condensa e non si riesce a vedere niente, ma se sotto è pulita senza macchie e aloni potrebbe essere buona. Hai seguito alla lettera i passaggi che ho scritto nella guida? Magari ti è sfuggito qualcosa
Per quanto riguarda i colori, sono convinto sia un problema di foto, questa mattina quando li guardavo erano di colore uniforme. Per quanto riguarda l'acqua, purtroppo sono delle (seppure piccole piccole) pozzette.

Ho inoltre letto (questa mattina purtroppo) un post di RR che dice che nel frigo vanno messe a testa in su, e non a testa in giù in quanto la gravità tira fuori l'eccesso di H2O nelle piastre.

Si non mi scoraggio, anzi, vediamo come procede questo transfer e se non tutto sarà da buttare. Ho già ordinato altre 25 piastre così da poter fare nuove prove. Devo affinare la tecnica in SAB in quanto sono un pò pasticcione, e anche il pouring dell'agar. Purtroppo non avendo modo di fare altrimenti, non ho tenuto bene conto di aspettare alla giusta temperatura per versare. Per il resto ho seguito bene o male tutti i passi della tua guida! Spero che il clone vada bene in quanto la bestia era bella grande.

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Re: update agar agar

Messaggio da asklepios » mer lug 22, 2020 1:07 pm

Anche io ricordo di aver letto questa cosa delle piastre a testa in giù, e da lì le ho sempre tenute a testa in su. Anche se non hai usato un termometro, mi sembra di vedere tutto sommato poca condensa. Dicono che quando versi l'agar deve essere caldo al tocco ma non tanto da scottarti

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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » mer lug 22, 2020 1:55 pm

asklepios ha scritto:
mer lug 22, 2020 1:07 pm
Anche io ricordo di aver letto questa cosa delle piastre a testa in giù, e da lì le ho sempre tenute a testa in su. Anche se non hai usato un termometro, mi sembra di vedere tutto sommato poca condensa. Dicono che quando versi l'agar deve essere caldo al tocco ma non tanto da scottarti
Infatti ho aspettato quando potevo maneggiare il tutto a mano, e poi ho versato. Si di per se ho avuto condensa solo su quelli in cima alle pile di petri versate, le altre poco o nulla in media.

Non vedo l'ora di scoprire come si evolve la faccenda.

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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » ven lug 24, 2020 9:47 am

Eccoci ad un nuovo update!

Oggi sono abbastanza soddisfatto di quello che vedo sulle piastre: per ora niente contam e un buon micelio che sta iniziando a crescere vigoroso, speriamo tenga.

La condensa è quasi al 100% sparita, e anche il clone sta iniziando a diventare bello bianco. Le piastre usate per il transfer, quelle vecchie, odoravano tutte di fungo, il chè mi fà ben sperare.

Di seguito le foto:
https://ibb.co/t46wrB8
https://ibb.co/mFjYCnj
https://ibb.co/HrMBzjD
https://ibb.co/XLqgmfL
https://ibb.co/PZywZX7
https://ibb.co/v4sWFJC
https://ibb.co/1KvkZSG

In una piastra il transfer è un pò nero, ma non si tratta di contam, quanto di cenere rimasta sul bisturi (domanda posta ad @asklepios l'ultima volta).

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Re: update agar agar

Messaggio da asklepios » ven lug 24, 2020 11:42 am

Complimenti, sono perfette. Quando colonizzano potresti già usarle per inoculare i cereali (se restano così pulite), oppure se ti senti coraggioso fare un altro transfer e poi una coltura liquida. Ancora congratulazioni

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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » ven lug 24, 2020 12:19 pm

Che bello! non potevo sentire parole migliori :)

Ho una domanda relativa allo storing. Siccome tra 2 settimane vado in ferie, e starò via per due settimane, che mi conviene fare? il top sarebbe poterle mettere in frigo e una volta tornato a casa cominciare coi lavori di inoculazione grain.

Per quanto riguarda fare un altro transfer, se le cose restano così proverei a transferare solo le piastre che mi piaciono meno, mentre le piu promettenti potrei tenerle direttamente x inoculare granaglie. Immagino che per quanto riguarda il clone, mi conviene farlo almeno un trasfer. Che dici?

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Re: update agar agar

Messaggio da asklepios » ven lug 24, 2020 3:04 pm

Le puoi mettere in frigo tranquillamente. Anzi a prescindere ti consiglierei di tenere almeno una o due piastre con micelio pulito in frigo, come "banca" per le grow future. Ti risparmia il tempo di dover ripartire dalle spore.

Le piastre che ti piacciono meno volendo puoi eliminarle direttamente ed espandere solo le più belle. Almeno un transfer da clone lo farei

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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » ven lug 24, 2020 3:33 pm

perfetto. grazie mille!

Devo ammettere che non lo credevo così entusiasmante questo hobby, mi sta davvero divertendo e interessando un sacco!


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Re: update agar agar

Messaggio da Terenzio_Terenzio » lun lug 27, 2020 9:33 pm

Come di consueto, eccoci con un altro update.

a sei giorni dal primo transfer, la situazione è questa: https://ibb.co/f85Hgft
Devo dire che non mi dispiace, a parte una piccola contaminazione (che ho cerchiato in arancione sulla piastra in alto a dx). Le altre piastre sono pulite, i possibili colori che si potrebbero vedere sono dovuti alla luce, ho controllato più volte.

In basso a sx invece c'è il clone, che sta andando alla grande. I due cavalli per ora vincenti mi sembrano il secondo dall'alto a dx, il primo in alto a sx e il clone (non che gli altri mi facciano schifo).

Penso che sicuramente quello contaminato lo "transfero" nuovamente perchè alcune parti mi piaciono proprio, il clone pure lo transfererò e credo che almeno due li terrò invece come banca.
Nel frattempo ieri ho inoculato tre piastre con spore di B+ da una impronta fatta con gli ultimi raccolti. Ho anche messo mano su spore di Reishi e Lion's Mane, penso che una volta tornato dalle ferie mi aspetterà un bel periodo :)

Siccome penso di fare i transfer domani, ho tolto le petri vergini dal frigo e messe a testa in giù, ho notato che così facendo, con queste temperature la condensa tende ad andarsene abbastanza. Ho anche sperimentato una "tecnica"
per togliere l'acqua in eccesso in caso ce ne sia troppa nella piastra: tenendole sempre a testa in giù, in SAB, apro appena appena la piastra e faccio "scolare" la stessa, stando attento a non creare contatto tra agar e acqua. Ora, non so se questa mossa abbia senso o se mi abbia sputtanato tutto, però mi era parsa comoda per lo scopo. Che dici @asklepios , ho fatto 'na cazzata secondo te?

Ho un'altra domanda inoltre: se facessi i transfer domani, e tra 13 gg le metto in frigo quando vado in ferie, non creo casini al micelio?

grazie e ciao belli!

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