No-pour con piastre di Petri in vetro

[albert ergot]

Salve a tutti, mi sto accingendo a fare il mio primo tentativo in bulk, sto comprando materiali e studiando il procedimento. Nella wiki viene descritto come preparare l'agar, sterilizzarlo, come successivamente portarlo alla temperatura giusta con il bagno di raffreddamento e come infine versarlo nelle piastre di Petri in SAB.

Si parla anche di alternative no-pour, ne ho letto un po' anche su Shroomery. In questi casi però si sconsiglia l'uso di piastre di Petri perché, quotando la wiki, "sono troppo basse e la soluzione bollirebbe fuori dai bordi", che ha decisamente senso. Quindi stavo pensando, perché non fare come segue:

1. versare l'agar una volta pronto subito nelle piastre di Petri;
2. coprire con uno strato di stagnola;
3. tappare con il suo tappo di vetro;
4. impilare e avvolgere con stagnola come sempre;
5. sterilizzare tutto quanto.

Eventuali schizzi di agar dovuti alla bollitura dovrebbero restare nel lato interno della stagnola. (?)

Le piastre così preparate resteranno avvolte fino al momento dell'inoculazione/trasferimento in SAB:

1. prendere una piastra di Petri dalla pila;
2. togliere il tappo di vetro e la stagnola (metterla da parte);
3. inoculare o trasferire;
4. tappare con il tappo di vetro;
5. sigillare con pellicola.

Sto scrivendo tutto questo senza aver provato, sono in attesa di materiali, altrimenti l'avrei già fatto. Qualcuno ha provato una cosa del genere? Potrebbe funzionare? È una cagata pazzesca (citando Fantozzi)?

[asklepios]

Non capisco cosa intenda per questo tappo di stagnola. Per come la vedo, le opzioni sono due: il "tappo" interno ha un diametro inferiore della parte più bassa della piastra di Petri. Questo non penso funzionerebbe in quanto l'alluminio affonderebbe in parte nel liquido, e a piastra solidificata togliere l'alluminio vorrebbe dire rimuovere insieme ad esso la massa dell'agar. L'altra opzione sarebbe avvolgere completamente la parte inferiore della piastra, e non vedo alcun vantaggio rispetto ad avvolgere la piastra nella sua interezza. In entrambi i casi avresti agar al di fuori della piastra, che in un caso finisca nell'involucro o in un caso sulle piastre sottostanti, è comunque un bordello. Se proprio vuoi provare comunque, il problema della bollitura è più rilevante quando la pressione viene rilasciata tutto d'un colpo. Se lasci raffreddare la pentola gradualmente nel corso di diverse ore e non rilasci la pressione manualmente, è possibile che avrai delle piastre accettabili. L'idea di "raccogliere" l'agar fuoriuscito non mi sembra particolarmente appetibile onestamente. Meglio cercare di non farlo fuoriuscire o usare alternative no pour. Se volessi provare a sterilizzare le piastre con l'agar al loro interno, un altro accorgimento potrebbe essere di versare molto poco agar in ogni piastra. Uno strato di 2 mm dovrebbe essere sufficiente.

[albert ergot]

L'idea presuppone che il tappo sia più grande della vaschetta, sono un totale ignorante in materia, ma credo di averne viste anche fatte in questo modo. Lo scopo del tappo di stagnola è evitare che l'agar vada a finire sul tappo di vetro, creando appunto il bordello. Cosa che non viene scongiurata avvolgendo interamente tutta la piastra.

Allego uno stupendo diagramma, per dare un'idea:

Codice: Seleziona tutto

   ____________
   |          |   tappo
  --------------  stagnola
    |________|    vaschetta

Poi chiudendo il tutto, la stagnola resterebbe sulla parte alta.

Di nuovo, facilissimo che la cosa non abbia minimamente senso... aggiornerò questo thread non appena avrò fatto qualche prova.

[asklepios]

Vedi tu. Secondo me è un lavoraccio inutile. L'agar che bolle finisce comunque fuori attorno alla base, anche se non tocca il tappo. Per quale motivo non vuoi versarlo dopo la sterilizzazione?

[albert ergot]

Solo per semplificare il processo e per non avere la SAB "montata" per ore mentre si aspetta che l'agar versato nelle piastre raffreddi.

[asklepios]

Prova, tentar non nuoce!

[albert ergot]

Beh, sembra aver funzionato!

Allego alcune immagini del procedimento:



L'agar l'ho versato per circa 4mm (ad occhio) nelle vaschette da 60mm, coperto con stagnola, coperto ulteriormente con il tappo di vetro. Poi ho impacchettato le piastre di Petri a gruppi di tre e messe in pentola a pressione, poste sopra il distanziatore dato in dotazione. Ho lasciato a regime per mezz'ora e poi lasciato raffreddare per altre 3 ore e mezzo.

Alla fine quando sono andato a scartarle nella SAB per inoculare, l'agar era perfetto, come appena versato, niente schizzi né condensa sul vetro, e niente sembra essere fuoriuscito.

L'unica nota riguarda le piastre di Petri in vetro in generale, che a quanto pare sono un po' tutte come queste che ho preso (Amazon). La differenza di diametro tra tappo e vaschetta è notevole, come si vede dalla foto, quindi usare una striscia di parafilm/pellicola sui lati non è sufficiente in quanto si rischia di lasciare comunque aperto un bello spiraglio, vero è che c'è comunque anche il vetro stesso a separare, però secondo me occorre cambiare modo di sigillarle.



Io ho risolto avvolgendo tutta la piastra nella pellicola, sembra andare bene ma è stato parecchio scomodo da fare in SAB, con la pellicola che si appiccica su se stessa, potrei forse ottimizzare pre-tagliando i fogli di pellicola, oppure usare proprio un altro metodo... Questo è il risultato finale:



Dalla foto non si vede molto, ma credo sia abbastanza chiaro dal vivo per percepire la crescita su agar.

[asklepios]

Confermo che anche la maggior parte delle mie piastre in vetro sono così distanziate. La pellicola è sufficiente anche se copri solo i bordi, devi centrarla sullo spigolo più che sul lato della piastra. In teoria non è neanche fondamentale, il coperchio è già sufficiente, è più per facilitarne a manipolazione senza rischiare di aprirle accidentalmente

Per le piastre in vetro dai un'occhiata anche su AliExpress e eBay, in genere costano meno. Ci sono anche ditte italiane che le forniscono a poco prezzo, se cerchi nel forum qualcuno le aveva anche ordinate, ma non saprei dirti il nome. Amazon in genere è molto costoso, a meno che non trovi l'occasione