update agar agar
Re: update agar agar
Scusate se mi intrometto.
Ho delle domande a proposito delle colutre su agar.
È normale che il micelio, ammesso che lo sia, sia così diafano? L'ho sempre visto in modo diverso. Alla piastra è stato aggiunto il micelio 4 giorni fa.
https://ibb.co/5sdVL3V
https://ibb.co/Bj75jhC
https://ibb.co/y03bTtD
È normale che l'agar si sciolga? Forse ne ho messo troppo poco.
https://ibb.co/0tWzVWW
Le foto non sono il massimo.
Ho delle domande a proposito delle colutre su agar.
È normale che il micelio, ammesso che lo sia, sia così diafano? L'ho sempre visto in modo diverso. Alla piastra è stato aggiunto il micelio 4 giorni fa.
https://ibb.co/5sdVL3V
https://ibb.co/Bj75jhC
https://ibb.co/y03bTtD
È normale che l'agar si sciolga? Forse ne ho messo troppo poco.
https://ibb.co/0tWzVWW
Le foto non sono il massimo.
Re: update agar agar
Per la consistenza 20g/L è un agar bello duro. Io sono arrivato fino a 8g/L per far germinare le spore. Non c'è micelio su quella piastra, ma una bella pozza batterica
- Terenzio_Terenzio
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- Iscritto il: lun giu 22, 2020 2:40 pm
Re: update agar agar
confermo ciò che dice @asklepios, lì hai una bella cricca di batteri! Io seguo la ricetta FDA che se non erro è (per il MEA agar):
30 g Malt extract
20 g Agar
1 L Distilled water
io per ora ho sempre usato questo e si, un po duro è, ma non ho ancora avuto problemi.
cambiando discorso, settimana prossima posto un paio di foto del reishi su agar e di mckennaii sempre su agar, stanno venendo belli belli
30 g Malt extract
20 g Agar
1 L Distilled water
io per ora ho sempre usato questo e si, un po duro è, ma non ho ancora avuto problemi.
cambiando discorso, settimana prossima posto un paio di foto del reishi su agar e di mckennaii sempre su agar, stanno venendo belli belli
Re: update agar agar
Con duro intendevo in senso positivo, duro al punto giusto, penso sia la concentrazione che si usa un po' dappertutto
Re: update agar agar
Ho usato 4,5 g su 250 ml.
Niente micelio dici? caspita
Niente micelio dici? caspita
Re: update agar agar
No zero. Non preoccuparti, è normale le prime volte, ci devi prendere un po' la mano
Re: update agar agar
È possibile che il mio errore sia dovuto al fatto che per fare il clone abbia usato un pezzetto troppo piccolo? Ho usato un pezzettino della parte interna del fungo (verso la parte terminale del gambo, vicino al cappello); il pezzettino era abbastanza piccolo: poco più della metà di un chicco di riso. Poi, sull'agar è divenuto scuro (per la psilocibina), ma non ne ho mai visti di cloni che sull'agar rimanessero scuri.
Re: update agar agar
Terenzio_Terenzio io ho utilizzato miele
Re: update agar agar
No, la dimensione non c'entra, è sicuramente un problema di tecnica (perdona i doppi sensi)
Re: update agar agar
Non riesco a capire cosa sbaglio. Proverò fino a riuscirci, questo è sicuro
Re: update agar agar
A giudicare da dove parte l'alone, direi che è proprio l'inoculante che ha fatto danni. Il fatto che poi l'agar fosse un po' bagnato sicuramente ha solo peggiorato la situazione. Hai seguito la procedura per la clonazione passo passo? Bisturi arancione sulla fiamma, subito all'interno della SAB, fungo aperto senza toccarlo direttamente con le mani o con il bisturi? A parte che poi hai detto il pezzetto di fungo si è scurito, ma io lo vedo bianco nella foto, quindi è anche possibile che il micelio avesse cominciato a svilupparsi, per poi essere soppresso dai batteri
Re: update agar agar
Dici che l'agar è troppo bagnata? Sicuramente ha peggiorato; ha portato in giro quello che c'era nell'inoculante.
Sì sì l'ho seguita. Però la lama non l'ho portata proprio al rosso/arancione.
Le foto che avevo messo erano di transfer dai cloni. Ho fatto così perché c'erano troppe contaminazioni.
Queste sono le due piastre con i cloni:
https://ibb.co/jTJWYyd
https://ibb.co/qgjWshX
Questo è uno dei 5 transfer dai cloni, credo che forse questo si salvi:
https://ibb.co/k3FC6pS
https://ibb.co/FVLghzF
Sì sì l'ho seguita. Però la lama non l'ho portata proprio al rosso/arancione.
Le foto che avevo messo erano di transfer dai cloni. Ho fatto così perché c'erano troppe contaminazioni.
Queste sono le due piastre con i cloni:
https://ibb.co/jTJWYyd
https://ibb.co/qgjWshX
Questo è uno dei 5 transfer dai cloni, credo che forse questo si salvi:
https://ibb.co/k3FC6pS
https://ibb.co/FVLghzF
Re: update agar agar
Ci sono batteri in tutte le foto. Nella prima forse c'è del micelio ma è troppo sfocata per poter dire con certezza. Dai un'occhiata a questo posto. Un'altra possibile via di contaminazione che mi viene in mente è dovuta al bordo alto dei vasetti che stai usando. L'aria soprastante l'agar sterile non deve vedere niente se non il tetto della SAB e la parte sterilizzata del bisturi. Un po' difficile se il bordo è alto, ma inclinando un po' verso il lato dovresti riuscire. Ricordati che né il manico del bisturi né le tue mani sono sterili, piovono batteri. Sono piastre versate o sterilizzate con l'agar già dentro? Nel primo caso potrebbe anche essere un errore al momento di versarle. Descrivi un po' il tuo procedimento
Re: update agar agar
Ho cercato di non passare sopra i vasetti aperti con le mani o con il bisturi, sono quasi certo di non esserci mai passato. Nell'aprirli e nel maneggiali, li ho sempre inclinati. Ammetto che i vasetti non sono affatto pratici. Le piastre petri le ho ordinate e mi arriveranno più avanti. Sono enormemente più pratiche.
Il procedimento che ho fatto è il seguente:
ho preparato l'agar in un becker e ancora calada l'ho versata nei barattoli. Successivamente ho avvitato il tappo lasciandolo socchiuso, ho messo la stagnola e poi in pentola a pressione a 15 psi per un'ora. Quando si sono raffreddati e solidificati li ho trasferiti nella SAB chiudendo il coerchio. Non li ho più aperti fino a quando non ho messo l'inoculante.
Io mi sono sempre riferito ai vasetti con la parola petri per semplicità comunicativa. Di fatto per ora utilizzo i vasetti.
Il procedimento che ho fatto è il seguente:
ho preparato l'agar in un becker e ancora calada l'ho versata nei barattoli. Successivamente ho avvitato il tappo lasciandolo socchiuso, ho messo la stagnola e poi in pentola a pressione a 15 psi per un'ora. Quando si sono raffreddati e solidificati li ho trasferiti nella SAB chiudendo il coerchio. Non li ho più aperti fino a quando non ho messo l'inoculante.
Io mi sono sempre riferito ai vasetti con la parola petri per semplicità comunicativa. Di fatto per ora utilizzo i vasetti.
Re: update agar agar
Sì è perfetto. È anche una questione di pratica, magari neanche te ne sei accorto. Vedrai che continuando a provare migliorerai in fretta, se poi ti arrivano le Petri come si deve sarà sicuramente più facile
Re: update agar agar
Già appena avrò le petri si inizierà a lavorare come si deve.
Su una mia tortina sta crecendo un fungo, appena è maturo prendo l'impronta e faccio dei cloni. Così da non perdere il micelio e doverlo ricomprare.
Sulle impronte sporali ho un dubbio: le spore depositate sull'alluminio non sono piene di contaminanti? Il fungo non è cresciuto in un ambiente sterile e quindi sulla suprficie esterna (lamelle) dovrebbero esserci molti microrgamismi, non vanno anche questi a depositarsi insieme alle spore e a contaminare tutto? Anche se poi si vanno a far germinare su agar per pulirle, la piastra alla fine sarà piena zeppa di contaminazioni.
Su una mia tortina sta crecendo un fungo, appena è maturo prendo l'impronta e faccio dei cloni. Così da non perdere il micelio e doverlo ricomprare.
Sulle impronte sporali ho un dubbio: le spore depositate sull'alluminio non sono piene di contaminanti? Il fungo non è cresciuto in un ambiente sterile e quindi sulla suprficie esterna (lamelle) dovrebbero esserci molti microrgamismi, non vanno anche questi a depositarsi insieme alle spore e a contaminare tutto? Anche se poi si vanno a far germinare su agar per pulirle, la piastra alla fine sarà piena zeppa di contaminazioni.
Re: update agar agar
Sì esatto. Conta però la proporzione: per quanto possano esserci contaminanti, la quantità di spore è comunque molto alta. La seconda impronta però ovvia in parte a questo problema, in quanto la maggior parte dei batteri cadono sulla prima impronta. Se quindi vuoi usare un'impronta per la PFTek, la seconda dovrebbe essere meglio
Re: update agar agar
Quindi si possono fare più impronte con un solo fungo, non lo sapevo.
È possibile mettere le spore direttamente sulle petri, senza lasciale essiccare sulla stagnola?
Il mio intento è usare le spore e farle germinare su agar; pulire il micelio e poi inoculare i vasi di spawn.
È possibile mettere le spore direttamente sulle petri, senza lasciale essiccare sulla stagnola?
No no non voglio inoculare tortine, la PFTek l'ho usata solo la prima volta. Dubito che la userò ancora.Se quindi vuoi usare un'impronta per la PFTek, la seconda dovrebbe essere meglio
Il mio intento è usare le spore e farle germinare su agar; pulire il micelio e poi inoculare i vasi di spawn.
Re: update agar agar
Se usi l'agar le spore prendile tanto per avercele, volendo puoi anche farne a meno. Se hai agar e funghi a disposizione la clonazione rimane la via più veloce. Volendo puoi prendere la seconda impronta su agar, ma in genere per germinare le spore ne basta una quantità davvero minima. Leggi bene la guida che ti ho mandato su come prendere le impronte sporali, spiega bene questa cosa delle due impronte e altre
Re: update agar agar
grazie per i consigli